Безопасность и переносимость мезенхимальных стволовых клеток из вартонова студня у пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна: клиническое исследование фазы 1

Основные положения и результаты:

Среди опубликованных исследований это небольшое корейское исследование ближе всего к типу клеток, который используется в нашей клинике. Мезенхимальные стволовые клетки из вартонова студня донорской пуповины вводили через вену мальчикам с мышечной дистрофией Дюшенна (МДД). Исследование было регулируемым исследованием фазы 1, одобренным Министерством безопасности пищевых продуктов и лекарственных средств Кореи и проведенным в Медицинском центре Samsung в Сеуле.

В исследование включили шестерых мальчиков, каждый получил одну инфузию, наблюдение длилось 12 недель. Серьезных нежелательных явлений и дозолимитирующей токсичности не было. Функциональные тесты через 12 недель не показали значимых изменений, а способность ходить и двигательные оценки в среднем снизились. Авторы заявляют, что результатов недостаточно, чтобы показать эффективность. Контрольной группы не было.

Цель:

Определить безопасность, переносимость и дозу EN001, аллогенного продукта из мезенхимальных стволовых клеток вартонова студня ранних пассажей, у детей с МДД. Эффективность оценивали только в пробном порядке.

Методы:

В исследовании использовали открытый дизайн с эскалацией дозы (“3+3”). Трое мальчиков получили низкую дозу, и комитет по оценке безопасности изучил их данные, прежде чем еще трое получили высокую дозу. Дозолимитирующей токсичностью считали любое нежелательное явление 3 степени или выше в течение 2 недель после инфузии.

Семь мальчиков прошли скрининг, шестеро были включены в период с января по октябрь 2022 года. Критерии включения:

• Мужской пол, возраст от 2 до 18 лет
• Подтвержденная мутация МДД и клинические признаки МДД (проксимальная слабость, утиная походка, симптом Говерса)
• Стабильная доза системных кортикостероидов, которая, как ожидалось, останется неизменной на протяжении всего исследования

Мальчиков исключали при фракции выброса левого желудочка ниже 50% по данным эхокардиографии, потребности в респираторной поддержке или вентиляции через трахеостому, генной терапии или аталурена в предыдущие 24 недели либо клинически значимых отклонениях в скрининговых анализах крови.

Участникам было от 10,0 до 15,8 года, все продолжали ходить, исходная дистанция шестиминутной ходьбы составляла от 231 до 346 метров, а баллы по шкале North Star Ambulatory Assessment (NSAA) составляли от 8 до 28 из 34. Пятеро получали дефлазакорт и один преднизолон.

Одну партию клеток из одной донорской пуповины размножали в течение трех пассажей (около 20 дней) в среде с 10% фетальной бычьей сыворотки, затем замораживали в жидком азоте по 5 миллионов клеток в пакете объемом 10 мл. Контроль перед выпуском включал стерильность, микоплазму, эндотоксин, количество клеток, жизнеспособность и поверхностные маркеры (положительные по CD44, CD73, CD90, CD105, CD166 и отрицательные по CD11b, CD14, CD19, CD34, CD45, HLA-DR).

Низкая доза составляла 500 000 клеток на кг. Высокая доза составляла 2,5 миллиона клеток на кг, то есть дозу, которая сработала у мышей mdx. На практике мальчики из группы высокой дозы получили от 140 до 201 мл клеточной суспензии.

Пакеты размораживали на водяной бане при 37°C и вводили внутривенно в течение 10 минут. Премедикация проводилась по усмотрению исследователя и состояла из гидрокортизона от 1 до 2 мг/кг, лоразепама 0,1 мг/кг, ондансетрона и хлорфенирамина. На протяжении всего времени контролировали жизненные показатели, насыщение кислородом и ЭКГ.

Нежелательные явления и креатинкиназу (КК) в сыворотке регистрировали при каждом из семи визитов. Спирометрию, динамометрическую силу разгибателей колена и сгибателей локтя, NSAA и тест шестиминутной ходьбы проводили в начале исследования и на 12-й неделе. Промежуточные данные до 36 недели приведены в приложении. Наблюдение до 5 лет запланировано.

Результаты:

Безопасность: За 12 недель было 18 нежелательных явлений, 6 в группе низкой дозы и 12 в группе высокой дозы. Хотя бы одно было у каждого мальчика. Все были 1 степени, ни одно не было серьезным.

• Покраснение, боль и отек в месте инфузии возникли у 2 из 3 мальчиков в группе высокой дозы и ни у одного в группе низкой дозы. Они прошли в течение суток.
• Головная боль у 3 мальчиков (1 в группе низкой дозы, 2 в группе высокой дозы). Одного мальчика примерно в течение суток беспокоил запах продукта.
• Остальные: диспепсия, боль в груди и болезненность при пальпации (по одному мальчику, низкая доза), боль в костях (один мальчик, высокая доза), инфекция SARS-CoV-2 у 2 мальчиков и простуда у 2.
• Ни во время одной из инфузий не было лихорадки, изменения артериального давления, сыпи, затруднения дыхания или шока.
• К 36 неделе появились еще три нежелательных явления 1 степени (всего 21). Отсроченных явлений, связанных с клетками, не отмечено.
• Эхокардиограммы у четырех мальчиков через период от 6 до 12 месяцев были нормальными.

Двигательная функция: Средний балл NSAA снизился на 3,33 балла в группе низкой дозы и на 3,00 балла в группе высокой дозы за 12 недель. Индивидуальные баллы изменились так: с 18 до 15, с 25 до 17, с 18 до 19, с 8 до 5, с 28 до 22 и с 14 до 14. Один мальчик прибавил один балл, у одного результат не изменился, у четырех снизился, у одного из них на 8 баллов.

Дистанция шестиминутной ходьбы снизилась в среднем на 13,8 метра (низкая доза) и на 47,4 метра (высокая доза). Один мальчик из шести прошел больше, чем в начале исследования.

Сила разгибателей колена снизилась на 0,70 фунта в группе низкой дозы и выросла на 0,88 фунта в группе высокой дозы. У четырех из шести мальчиков наблюдался некоторый рост. Сила сгибателей локтя слегка снижалась до 36 недели.

Дыхание: Форсированная жизненная емкость легких в процентах от должной выросла на 6,67% (низкая доза) и на 1,00% (высокая доза), ни то, ни другое не было статистически значимым. Один мальчик не смог пройти тест на 12-й неделе из-за боли в костях. Давление на вдохе и выдохе не изменилось.

КК: Уровни имели тенденцию к снижению до 12-й недели без статистической значимости, а затем у всех мальчиков вернулись к исходным. У некоторых мальчиков КК резко повышалась во время COVID-19. Авторы указывают, что не смогли определить, был ли спад эффектом лечения или обычным колебанием.

Выводы:

Авторы заключают, что однократная внутривенная доза этих клеток была безопасной и хорошо переносилась у шести мальчиков с МДД, а эффективность можно установить только в более крупных рандомизированных исследованиях с повторным введением. Они зарегистрировали многоцентровое рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование фазы 1/2 (NCT06328725).

В числе ограничений они называют одну дозу, очень малую выборку, 12 недель наблюдения, тогда как большинство исследований МДД длится от 1 до 2 лет, а также инфекции COVID-19, исказившие измерения. Кроме того, контрольной группы не было, а у мальчиков в возрасте от 10 до 15 лет снижение функции ожидалось и без лечения, поэтому функциональные результаты не позволяют судить, повлияли ли клетки на состояние, в ту или другую сторону.

Справочная информация:

Авторы не утверждают, что клетки превращаются в мышцу. На основании своих опытов на мышах они предполагают, что клетки выделяют защитные факторы: XCL1 (лимфотактин), который, по их сообщению, защищает мышечные клетки от запрограммированной гибели, и MMP-1, который, по их сообщению, уменьшает рубцевание мышц. Они утверждают, что клетки 3 пассажа более активны и менее склонны к старению в культуре, чем клетки более поздних пассажей, используемые во многих продуктах, поэтому их доза ниже, чем в других исследованиях МСК.

Авторы отмечают, что временная лихорадка является самым частым побочным эффектом инфузий клеток, и частично связывают ее с жидкостью-носителем. Они использовали собственный состав без компонентов животного происхождения и не зарегистрировали лихорадки у шести мальчиков. При столь малом числе участников из этого наблюдения нельзя сделать никаких выводов.

Клетки предоставила компания ENCell Co., Ltd., разработчик продукта. В статье указано, что спонсор не участвовал в интерпретации данных и написании отчета, а авторы заявили об отсутствии конфликта интересов. Финансирование поступило из корейских государственных грантов на исследования в области здравоохранения и от Медицинского центра Samsung.